ELISPOT: potentielle in vitro test voor contactallergie - protocolontwikkeling en eerste resultaten

Introductie. In ELISPOT (Enzyme-Linked ImmunoSPOT) assays worden cytokine-producerende cellen aangetoond. Doel van deze studie is de ontwikkeling van een ELISPOT protocol voor de diagnostische detectie van specifieke T cellen bij contact allergie.

Methode. Uit perifeer bloed van gezonde donoren en nikkel (Ni)-allergische patiënten werden PMBC geisoleerd en in rond-bodem kweek-platen met medium, tetanus toxoid of NiSO4 gepre-incubeerd en in Millipore platen verder geincubeerd. 6 combinaties van pre-incubatie en incubatie tijden en verschillende celconcentraties (1 - 5x10⁵/well) werden getest. In 2 Ni-allergische patiënten werd de invloed van het verrichten van Ni-huidtesten op specifieke T cellen in het bloed bestudeerd.

Resultaten. De combinatie van 24h-pre-incubatie en 48h-incubatie toonde de grootste test-sensitiviteit. De optimale celconcentratie voor detectie van IFN-γ producerende cellen was 2x10⁵ PBMC/well en voor IL-5 4x10⁵ PBMC/well. Preliminaire resultaten wijzen erop dat applicatie van Ni-huidtesten resulteert in een daling van Ni-specifieke T cellen na 2 dagen met normalisering na 6/7 dagen.

Discussie. Deze voorlopige resultaten (van een lopend onderzoek) laten zien dat ELISPOT een gevoelige in vitro test is om contact allergie aan te tonen. Verder onderzoek zal zich richten op de identificatie van het diagnostisch meest voorspellende cytokine (IFN-γ, IL-4, IL-5, IL-13) en de toepasbaarheid voor verschillende allergenen worden getoetst.

Reprint (PDF)

Links:

Sensimun - biomedical research outsourcing

dermatologist, venereologist and allergist in Krakow (Cracow)